تحتوي فيروسات مرض نيوكاسل على الحمض النووي الرايبوزي (RNA) والذي يكون بشكل غير مجزأ الى عدد من القطع. تنقسم هذه الفيروسات إلى سلالات مختلفة اعتمادا على درجة الامراضية للفيروس. ان الحمض النووي الفيروسي ليس متطابقًا بين هذه السلالات، وبالتالي يتطلب التشخيص الجزيئي استخدام زوج محدد من البريمرات لتضخيم منطقة معينة في الحمض النووي لكل سلالة. كان الهدف من هذه الدراسة هو ابتكار طريقة موثوقة وبسيطة لتشخيص أي إصابة بفيروس مرض النيوكاسل في تفاعل أنزيمي واحد باستخدام زوج جديد من البريمرات الشاملة. لتصميم هذه البريمرات، تم تحديد مناطق ذات تشابه كبير من جين الماتريكس (M) بين مجموعة من سلالات مختلفة من فيروس مرض النيوكاسل والتي تتوفر في قاعدة بيانات NCBI. تم تحديد الجزء المتشابه في الجين M من خلال محاذاة الجينات باستخدام برنامج Geneious. بالإضافة إلى ذلك، تم فحص جودة البريمرات المصممة باستخدام برنامج آخر لتحديد احتمالية حدوث ارتباطات غير مرغوب بها بين البريمرات. تم جمع 20 مسحة فموية بلعومية من 10 حمامات و 10 دجاجات تظهر عليها علامات مرض نيوكاسل. تمت تمرير جميع العينات لاستخراج الحمض النووي الرايبوزي وتضخيم الجينات باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدي (RT-PCR) والكمي الحقيقي (Real-Time RT-PCR) وكذلك تحديد تسلسل القواعد النتروجينية للقطعة التي تم تضخيمها. أظهرت النتائج أن كلا البرايمران (الامامي والعكسي) كانت ذات جودة ممتازة ولن تتسبب في حدوث مشاكل خلال عملية الـ PCR (اعتمادا على قيم دلتا G ، التي كانت أقل من -5). بالإضافة إلى ذلك، أظهرت نتائج RT-PCR و Real-Time RT-PCR أن قطعة من الجين M تم تضخيمها بنجاح من معظم العينات التي تم جمعها من الحمام والدجاج وهذا ما تم تأكيده أيضًا في تطبيق تقنية تسلسل القواعد النتروجينية والمعلوماتية الحيوية. تؤكد هذه النتائج أن هذا الزوج الجديد من البريمرات الشاملة يمكن استخدامه للكشف عن أي فيروس لمرض نيوكاسل ومن اي مضيف في تفاعل إنزيمي واحد.